Ustritsa kömelek lakkasy NRC 620-niň önümçiligi we biohimiki häsiýetnamasy we alma şiresini arassalaýyşdaky netijeliliginiň bahalandyrylmagy.

28°C-da 25 günlük statik inkubasiýadan soň, *Pleurotus ostreatus* NRC620-den alnan lakkaza kömelek ösdürip ýetişdirmek gurşawynda iň ýokary işjeňligi görkezdi. Bu ferment üçin optimal pH we temperatura derejeleri degişlilikde 3.0 we 70°C boldy. 40°C we 50°C-da 2 sagat inkubasiýadan soň, fermentiň işjeňligi degişlilikde 68.33% we 59.61% galdy. Sitrat-fosfat buferinde (pH 7.0) 2 sagat inkubasiýadan soň, fermentiň işjeňligi 100% galdy. 10 mM MgSO₄ we CuSO₄ goşulmagy fermentiň işjeňligini degişlilikde takmynan 21% we 35% ýokarlandyrdy, NaCl, MnCl₂, KCl we CaCl₂ bolsa fermentiň işjeňligini peseltdi. ABTS-i substrat hökmünde ulanmak bilen, *Pleurotus ostreatus* NRC 620 lakkazasynyň kinetiki parametrleri (Km we Vmax) degişlilikde 1,99 mM we 16,217 μmol min−1 L−1 boldy. Alma şiresiniň nusgalarynyň ferment bilen işlenilmegi pH-ny hem-de ýapyşyklygy ep-esli peseltdi we bu azalma saklamak wagtynyň artmagy bilen baglanyşykly boldy. Lakkaza bilen işlenilmegi alma şiresiniň umumy fenol mukdarynyň birneme azalmagyna getirdi, ýöne antioksidant işjeňliginiň peselmegi görülmedi.
Soňky ýyllarda ylmy işgärler azyk senagatynda ýaşyl biotehnologiýany ulanmaga ünsi jemlediler. Lakkaza azyk senagatynda iň peýdaly fermentleriň biri bolup, şiräni gaýtadan işlemek, çörek bişirmek, çakyr durnuklaşdyrmak we azyk önümleriniň organoleptik häsiýetlerini gowulandyrmak ýaly ugurlarda ulanylyşyny tapýar.¹Köp ýokary derejeli ösümlikler we mikroorganizmler lakkaza bölüp çykarýarlar,²deuteromisetler, askomisetler we basidiomisetler ýaly kömelekler hem lakkaza öndürip bilýärler.³Lakkaza (EK 1.10.3.2) üç dürli mis atomlaryndan ybarat bolan ulgam arkaly molekulýar kislorody suwa gaýtarýan we şeýlelik bilen dürli fenol birleşmelerini we aromatik aminleri oksidleşdirýän gök oksidazadyr. Miwe we gök önüm şireleriniň öndürilişi wagtynda fermentli we fermentsiz garaňkylaşma möhüm meselelerdir.⁴Bu maddalar şiräniň reňkine, tagamyna we ysyna ýaramaz täsir edýändigi üçin, olary aýyrmaly.⁵
Ähli miweleriň arasynda alma dünýäde we Ýewropa Bileleşiginde iň köp sarp edilýär. 2019-njy ýylda alma önümçiligi dünýäde üçünji orny eýeledi we 87 million tonnadan geçdi.⁶Almalaryň düzüminde köp sanly fenol birleşmeleri, şol sanda flavonoidler we kofein we hlorogen kislotasy ýaly fenol kislotalary bar.⁷Alma şiresi adatça arassa görnüşinde iýilýändigi üçin, süzgüçden geçirmek prosesinde fenol komponentleriniň takmynan 50% -den 90% -e çenlisi ýitirilýär.⁸Häzirki wagtda sarp edijiler polifenol mukdary ýokary bolan bulanyk alma şiresi ýaly az işlenen önümleri saýlamaga meýilli. Şeýle-de bolsa, onuň fenol mukdary ýokary bolandygy sebäpli, bu görnüşli alma şiresi reňkiniň üýtgemegine we garaňkylaşmagyna has-da sezewar bolýar.⁹Alma şiresiniň garaňkylaşmagyny azaltmak ýa-da öňüni almak üçin dürli tehnologiýalar, şol sanda 60–90°C-da pasterizasiýa ýaly ýylylyk bilen işläp bejeriş usullary ulanylýar.¹⁰Şeýle-de bolsa, Sauceda-Galveziň gözleglerine görä¹¹, termiki gaýtadan işlemek uçujy himiki maddalary ýok edip we alma şiresiniň organoleptik häsiýetlerine täsir edip biler. Termiki gaýtadan işlemek usullaryna alternatiwalara superkritik uglerod dioksidi, ultramelewşe şöhlelenme, ultrases, ýokary gidrostatik basyş ýa-da ýokary basyşly gomogenizasiýa girýär.¹²Bu tehnologiýalaryň netijeliligi we laýyk miwe suwlarynyň önümçiligi ulanylýan parametrlere we önümiň häsiýetlerine baglydyr. Olaryň giňden ulanylmagy ýokary çykdajylar, käbir azyk önümleriniň hiline ýaramaz täsirler ýa-da fermentleriň ýeterlik derejede işjeň däldigi bilen çäklendirilýär.^13,14
Lakkase miwe suwuny durnuklaşdyrmak we aýdyňlaşdyrmak üçin ulanylyp bilner.¹⁵Gökmen we beýlekiler.¹⁶Miwe suwuny arassalaşdyrmak üçin lakkaz ulanmagy maslahat berýärin, sebäbi ol fenol birleşmelerini polimerlere ýa-da oligomerlere öwürmek arkaly netijeli aýyrýar, bu bolsa islendik ultrafiltrasiýa membranasy tarapyndan aňsatlyk bilen aýrylýar, bu bolsa alma suwunyň 50°C-da alty hepde çenli durnukly reňkini we aýdyňlygyny saklamaga mümkinçilik berýär. Arassalanan *Trichoderma* lakkaz alýumin oksidi munçuklaryna immobilizasiýa edildi we alma suwunyň mikrob hapalanmagy sebäpli dörän tagamsyz birleşmeleri saýlama usulda aýyrmak üçin ulanyldy.¹⁷
Alma şiresiniň uçujy bölekleriniň takmynan 80-90% -i efirler we aldegidler bolup, olar şirä özboluşly ys berýär.¹⁸*Trametes versicolor*-dan alynýan lakkase alma şiresini arassalaşdyrmak üçin ýaş kokos gabyklaryndan tebigy süýümden ýasalan arzan daýanja goýuldy.¹⁹Öňki barlaglarda alma şiresiniň durnuklaşdyrylmagy (reňki we bulanyklygy) fermentsiz ýa-da immobilizasiýa usullary arkaly ýa-da ultrafiltrasiýa bilen utgaşdyrylyp öwrenildi.^5,19Şeýle-de bolsa, saklanýan wagtynda alma şiresiniň fiziki-himiki häsiýetlerine kömelek lakkazalarynyň täsiri belli däl. Şonuň üçin bu gözlegiň maksady kömelek lakkazalary bilen işlenenden we iki hepdelik sowadyjyda saklanandan soň alma şiresiniň fiziki-himiki häsiýetlerinde, fenol birleşmeleriniň düzüminde we antioksidant işjeňliginde üýtgeşmeleri eksperimental taýdan öwrenmekdi. Lakkazalar fenol birleşmelerini oksidleşdirmäge ukyplydyr, bu bolsa olary dürli senagat proseslerinde, şol sanda şire arassalaýjyda ulanmak üçin geljegi uly edýär. Bu gözlegde *Pleurotus ostreatus* NRC 620-den alnan lakkazalar öwrenildi we olaryň işjeňligi we şire arassalaýjyda netijeliligi üçin ideal şertlere üns berildi. Ustritsa kömelekleri (P. ostreatus NRC 620) boýunça gözlegler henizem çäkli bolsa-da, öňki gözleglerde Trametes versicolor we Ganoderma lucidum ýaly dürli kömelek çeşmelerinden alnan fermentler öwrenildi. Bu gözlegiň maksady bu fermentiň azyk senagatynda ulanylmagynyň mümkindigini bahalandyrmak we onuň özboluşly häsiýetlerini, esasanam ideal pH we temperaturasyny görkezmekdi.
2,2′-Azooksibis(3-etilbenzotiazolin-6-sulfon turşusy) (ABTS) Sigma-Aldrich (Kanada) kompaniýasyndan satyn alyndy. Beýleki ähli reagentler analitiki derejededi.
Milli ylmy-barlag merkeziniň Mikrob medeniýetini ýygnamak merkezi belli bolan ustriça kömelek ştammy NRC620-ni aldy. Subkulturadan soň, bu ştamm 4°C temperaturada kartoşka dekstroza agarynyň gytaklarynda saklandy. Inokulýasiýasy taýýarlamak usuly şeýledi: 10 günlük, doly ösen miselium kartoşka dekstroza agarynyň plastinkalaryna inokulýasiýa edildi we 28°C temperaturada inkubasiýa edildi. 10 günden soň, agar gurşawyndan steril metal deşiji arkaly diametri 12 mm bolan üç miselial blok aýryldy we 50 ml sterilleşdirilen medeniýet gurşawyndan (pH 5.0, Othman we beýlekiler tarapyndan öň beýan edilişi ýaly) ybarat pagta tıkaçlary bilen 250 ml Erlenmeyer kolbalaryna ýerleşdirildi.²⁰). Kulturalar 28°C temperaturada 18 günläp inkubasiýa edildi. Soňra kulturalar Whatman № 1 süzgüç kagyzyndan süzüldi we netijede dörän üstki gatlak ferment çeşmesi hökmünde hyzmat etdi.
Lakkazanyň aktiwligi substrat hökmünde ABTS ulanylyp kesgitlenildi. Reaksiýa garyndysy (2 ml) 500 μL 0,3 mM ABTS (0,1 M natriý sitrat buferinde eredilen, pH 4,5) we distilled suw bilen eredilen ferment nusgasynyň zerur mukdaryny öz içine aldy.^21,22Lakkazanyň ABTS-i otag temperaturasynda (28 °C ± 2) oksidleşdirip bilýändigini göz öňünde tutup, ABTS-iň oksidlenmesi 420 nm-de (ε) absorbsiýanyň artmagyny ölçemek arkaly kesgitlenildi.₄₂₀= 36,000 sm^-1 M ^-1) Agilent Carry-100 UV spektrofotometri ulanylyp. Minutda 1 μmol ABTS-i oksidleşdirmek üçin lakkaza işjeňliginiň bir birligi gerek boldy. Belogyň konsentrasiýasy içki gözegçilik hökmünde sygyryň syworotka albuminini ulanyp, Bredford usuly bilen kesgitlenildi.^23,24
Fermenti ustriça kömelek ştammy NRC 620-den alandan soň, onuň işjeňligi 28 °C-de statik şertlerde 25 günüň dowamynda dürli ösdürip ýetişdirme aralyklarynda ölçeldi.
Temperaturanyň lakkaza işjeňligine täsirini öwrenmek üçin 20-den 90 °C-a çenli temperatura aralygynda tejribeler geçirildi. Fermenti goşmazdan we reaksiýa başlamazdan öň, bufer (0.1 M natriý sitrat, pH 4.5) we substrat (ABTS) garyşdyryldy we dürli temperaturalarda 5 minutlap inkubasiýa edildi. Fermentiň termiki durnuklylygy 0.05 M natriý fosfat buferinde (pH 7.0) degişlilikde 40, 50, 60 we 70 °C-da 2 sagatlap inkubasiýa etmek arkaly bahalandyryldy. Soňra galan işjeňlik ABTS substraty ulanylyp bahalandyryldy.
pH-yň lakkaza işjeňligine täsiri ABTS-i substrat hökmünde 2,5-den 7,0-e çenli pH aralygy bolan 0,1 M sitrat-fosfat buferlerinde ulanmak arkaly bahalandyryldy. Ferment ergini pH durnuklylygyny bahalandyrmak üçin 40°C-de iki sagatlap 0,1 M sitrat we Tris buferlerinde (pH 3, 4, 6 we 7) inkubasiýa edildi. ABTS-iň substrat hökmünde ulanylanda galan işjeňlik inkubasiýadan soň hasaplandy.
Lakkaza dürli metal ionlaryny (Mg2+, Cu2+, Co2+, Ca2+, Zn2+, K+, Na+ we Mn2+) öz içine alýan natriý fosfat buferinde (0,05 M, pH 7,0) degişlilikde 2,5 mM we 10 mM konsentrasiýalarda 10 minutlap inkubasiýa edildi. Soňra reaksiýany başlatmak üçin substrat (ABTS) goşuldy we deňeşdirme işjeňligi bahalandyryldy.
Kinetiki parametrleri (Vmax we Km) kesgitlemek üçin pH 4.5-de dürli konsentrasiýalarda (0.025–3 mM) lakkaza bilen ABTS oksidlenmesi ölçeldi. Kinetiki^sabitlerMihaelis-Menten deňlemesiniň grafigi Lineweaver-Burk grafiki arkaly hasaplandy, bu grafik reaksiýanyň tizliginiň substrat konsentrasiýasynyň funksiýasy hökmünde ters gatnaşygyny görkezýär. Kinetiki sabitler GraphPad Prism 6.01 wersiýasyny ulanyp Lineweaver-Burk grafiki arkaly hasaplandy.
Almalary kran suwy bilen gowy ýuwandan soň, olar iki bölege bölündi we doly awtomatik Braun MP80 alma şire çykaryjy (Germaniýada öndürilen) arkaly şire çykaryldy. Şire dört gatlakly peýnirden süzüldi. Gözegçilik toparyna hiç hili ferment goşulmady, täze taýýarlanan alma şiresine bolsa 2,0% lakkaza (synag edilen iň netijeli konsentrasiýa) goşuldy we soňra iki hepde 4°C temperaturada saklandy.
Titrlenip bilýän kislotalylyk (TA) we pH Boulton we beýlekileriň usulyna laýyklykda kesgitlenildi.^al.27Her bir nusganyň pH derejesi sanly pH ölçeýji (JENWAY 3510 pH metr) arkaly ölçeldi. Titrlenip bilinýän kislotalylyk (TA) aşakdaky formula arkaly alma kislotasyna esaslanyp hasaplandy.
Bu ýerde V we C degişlilikde titrlemede ulanylan natriý gidroksid ergininiň göwrümi (ml) we konsentrasiýasy (0,1 mol/L). K alma kislotasynyň öwrüliş koeffisiýenti bolup, 0,067-e deňdir we W alma şiresiniň massasy (g).
Jemi ereýän gaty maddalar (^TDS) ähli şire nusgalarynyň mazmuny PAL-1 jübi refraktometri (ATAGO, Tokio, Ýaponiýa) arkaly kesgitlenildi. Her ölçegden soň, optik linza deionizirlenen suw bilen çaýkalyp, her bir alma şiresiniň nusgasy üç gezek synagdan geçirildi. Her bir nusga üçin gymmatlyk üç ölçegiň ortaça bahasy bilen hasaplandy. Her bir alma şiresiniň nusgasy üçin ortaça ± standart çykgyt hem bu netijeleriň ortaça bahasy bilen hasaplandy.
Alma şiresiniň nusgalarynyň wiskoelastikligi aýlanýan wiskometr (RV, Rheotest 2, Germaniýa) arkaly bahalandyryldy. Nusga wiskometriň “S2” silindriniň içine ýerleşdirildi. Görünýän wiskozimetr, gyryş stresiniň we gyryş tizliginiň egrisiniň eňňitligi bilen görkezildi, ol gyryş stresinden we dürli gyryş tizliklerinde (1.00-dan 437.4 s⁻¹-e çenli) degişli egrilerden hasaplandy. Görünýän wiskoziteli hasaplamagyň formulasy aşakdaky ýaly:
Bu ýerde η görünýän ýapyşyklyk (cP), τ kesiş stresi (dyn/sm²), γ kesiş tizligi (sek⁻¹) we (τ) aşakdaky formula boýunça moment (α) we silindr (Z) gymmatlyklaryny ulanyp hasaplanýar: τ = Z α.
Goňurlaşma indeksi Meidaw et usulyna laýyklykda kesgitlenildi^al.2910 ml şire nusgasy 2750 xg-da 10 minutlap santrifuga edildi. 5 ml şire üstki gatlagynyň 5 ml-i 95% etanol bilen garyşdyryldy. Garyndynyň siňdirilişi 420 nm-de Shimadzu UV spektrofotometri (UV-1601 PC) arkaly ölçeldi.
Umumy fenol mukdary (TPC) Boulton we beýlekiler tarapyndan beýan edilişi ýaly Folin-Ciocalteu reagentini ulanyp, kolorimetrik usulda kesgitlenildi.^[27]0-dan 500 mg/L-e çenli konsentrasiýalar üçin gal turşusynyň standart egrisi guruldy (^r²= 0.997). Netijeler gallik kislotasynyň ekwiwalentleri hökmünde görkezilýär (mg GAE/ml).
25 μL alma şiresine 125 μL distilled suw we 2850 μL FRAP erginini goşuň we garyndyny garaňky ýerde goýuň.³⁰min. Soňra Shimadzu UV spektrofotometri (UV-1601 PC) ulanyp, 593 nm-de absorbsiýany ölçeň. FRAP reagent 300 mM asetat buferini (pH 3.6), 20 mM demir (III) hloridi we 10 mM 2,4,6-tris(2-piridil)triazini (TPTZ) (40 mM HCl-de eredilen) 10:1:1 gatnaşykda garyşdyrmak arkaly taýýarlanyldy. Standart egri Trolox hökmünde ulanylyp döredildi (^R²= 0.999), we netijeler μM Trolox/ml hökmünde görkezilýär.
DPPH erkin radikallaryny arassalamak ukybyny bahalandyrmak üçin işlenilen we işlenilmedik şireleriň antioksidant işjeňligi DPPH usuly arkaly kesgitlenildi.³¹On mikrolitr şire metanolda 1 ml DPPH ergini (100 μM) bilen garyşdyryldy. Garaňkyda 30 minutlap reaksiýa geçirilenden soň, garyndynyň siňdirilişi 517 nm-de Shimadzu UV spektrofotometri (UV-1601 PC) arkaly ölçeldi. Netijeler kalibrleme egrisine esaslanyp, troloks ekwiwalentleri (μM troloks/ml) hökmünde görkezildi (_^R2= 0.990).
Alnan maglumatlar, fermentasiýanyň 18-nji gününiň ahyrynda NRC 620 ustriça kömeleklerinde lakkazanyň iň ýokary önümçiliginiň syn edilendigini we 1302 U/L işjeňlige ýetendigini görkezdi. Bu lakkazanyň önümçiligi üçin iň amatly ösdürip ýetişdirmek wagtyny kesgitlemek üçin esas bolup hyzmat etdi (1-nji surat). Ferment önümçiligi ösdürip ýetişdirmek wagtynyň artmagy bilen artsa-da, ösüş depgini ösdürip ýetişdirmek wagtyna gönüden-göni proporsional däldi; 21 günden soň ferment işjeňligi diňe 90 U/L ýokarlandy (1390 U/L çenli). Şonuň üçin, önümiň hasyllylygyny ösdürip ýetişdirmek wagtynyň artmagynyň ykdysady peýdasy bilen deňleşdirmek üçin iň amatly ösdürip ýetişdirmek wagty hökmünde ahyrsoňy 18 gün saýlandy.
Pleurotus ostreatus NRC 620-de ekin ekmek wagtynyň lakkaza hasylyna täsiri. Üç (12 mm) göbelek miseliýa bloklary 50 ml steril gurşawa ekildi we soňra dürli wagtlarda 28 °C-de ösdürilip ýetişdirildi.
Beýleki barlaglar bilen gabat gelýän netijelerimiz, kömelekleriň lakkazanyň iň ýokary derejede bölünip çykmagyna ýetmek üçin ideal ösüş döwrüniň 7 günden 36 güne çenli bolmagynyň mümkindigini görkezýär.³²Ezike we beýlekileriň pikiriçe,³³, *Trametes polyzona* WRF03 fermentasiýanyň dokuzynjy gününiň ahyryna çenli 1637 U/mg belogyň aýratyn aktiwligi bilen iň ýokary mukdarda lakkaza öndürdi. Mundan başga-da, Othman we beýlekiler.³⁴*Trichoderma harzianum* S7113-iň bäşinji günde köp mukdarda lakkaza bölüp çykarandygyny anykladylar. Lakkaza öndürilişiniň tizligi on dördünji günde iň ýokary işjeňlige ýetdi we soňra kem-kemden peseldi.³⁴Fermentleriň bölünip çykmagy esasy ösüş tapgyrynda hem bolup bilse-de, ol adatça orta tapgyrda iň ýokary derejä ýetýär we uglerod ýa-da azot çeşmesiniň sarp edilmegi bilen başlanýar.^34,35
Pleurotus ostreatus NRC 620-den alynýan lakkaza 50°C-den 80°C-e çenli giň temperatura aralygynda ýokary işjeňlik görkezse-de, iň ýokary işjeňlige (69–98%) golaýlaşsa-da, onuň iň ýokary işjeňligi 70°C-de syn edildi (2a-njy surat). Bu temperatura aralygyndan daşarda fermentiň işjeňligi takmynan 70°C-de peseldi. Bu netijeler fermentiň ýokary temperaturada işjeňdigini görkezýär, sebäbi ýokary temperatura reaksiýanyň kinetiki energiýasyny ýokarlandyrýar.
*Pleurotus ostreatus* NRC 620-de reaksiýa temperaturasynyň (a) we pH (b) lakkaza işjeňligine täsiri. Fermenti goşmazdan we reaksiýa başlamazdan öň garyndyny dürli temperaturalarda 5 minutlap öňünden inkubasiýa etmek arkaly 20-den 90 °C-a çenli temperatura gazanyldy. pH-yň lakkaza işjeňligine täsiri ABTS-i substrat hökmünde 2,5-den 7,0-e çenli pH aralygynda 0,1 M sitrat-fosfat buferini öz içine alýan erginlerde ulanyp bahalandyryldy.
Ezike we beýlekileriň pikiriçe^al.33, *Trametes polyzona* WRF03 lakkazasy üçin iň amatly temperatura 55 °C bolup, bu *Ganoderma lucidum* üçin bolan temperatura bilen birmeňzeşdir.^laccase36we *Trametes polyzona* KU-RNW02737 üçin optimal temperatura (50 °C) meňzeş^lakkaz . ^Baldrian38beýleki lignini dargadýan ferment ulgamlary ýaly, lakkaza üçin ideal temperatura aralygynyň 50 bilen 70 °C aralygyndadygyny belleýär.
Netijeler fermentiň pH 3.0-da iň ýokary işjeňligi görkezýändigini we pH 3.5-de 94% işjeňlige ýetendigini görkezdi. Şeýle-de bolsa, ol 2.5-den 7.0-e çenli giň pH aralygynda işjeňligini saklady (2b-nji surat). Mundan başga-da, ol kislotaly şertlerde neýtral ýa-da şerbetli şertlere garanyňda has ýokary işjeňligi görkezdi. Onuň işjeňligi pH 2.5-den 4.5-e çenli aralykda azyndan 77% galdy, ýöne pH 7.0-de diňe takmynan 38% ýetdi. *Trametes polyzona* WRF03-den alnan lakkaza üçin optimal pH 4.533 boldy, bu bolsa *Trametes polyzona* KU-RNW02737, *Trichoderma harzanium* 39, *Pleurotus* sp. 40 we *Trametes hirsuta* 41-den alnan lakkazalar üçin pH bilen birmeňzeşdir. Şeýle-de bolsa, Chairin we beýlekileriň geçiren gözlegine görä.⁴², *Polymorpha f. sp.* WR710-1-den alnan lakkaza üçin optimal pH 2.2, *Polymorpha f. sp.* IBL-04-den alnan lakkaza üçin optimal pH bolsa 5.043. Gidroksid anionlarynyň (lakkaza ingibitorynyň) T2/T3 lakkazasynyň mis atomlaryna baglanmagy neýtral ýa-da alkali pH şertlerinde lakkaza işjeňliginiň peselmeginiň sebäbi bolup biler. Bu bolsa T1 merkezinden T2/T3 merkezine içki elektron geçişini bozup biler we şeýdip^{çäklendiriji}fermentiň aktiwligi 23,44
Fermenti dürli temperaturalarda inkubasiýa etmek arkaly inkubasiýa wagtynyň we temperaturasynyň fermentiň durnuklylygyna täsir edýändigi anyklandy. Esasan hem, *Trametes polyzona* NRC 620-den alynýan lakkaza 40℃ we 50℃-de has ýokary durnuklylyk görkezdi we 120 minutdan soň başlangyç işjeňliginiň degişlilikde 68,33% we 59,61% -ni saklady (3a-njy surat). Tersine, şol bir şertlerde (40℃ we 50℃, 120 minut) *Trametes polyzona* WRF03-den alynýan lakkaza işjeňliginiň degişlilikde 64,38% we 42,92% -ni saklady.³³Tersine, inkubasiýa wagtynyň we temperaturasynyň artmagy *Trametes polyzona* NRC 620 lakkazasynyň durnuklylygyny peseltdi; 60℃ we 70℃-de 60 minut inkubasiýadan soň, onuň işjeňligi degişlilikde 39,24% we 1,72% -e çenli peseldi (3a-njy surat). Tejribe netijelerine laýyklykda, *Trametes polyzona* WRF03-den alnan lakkaza termiki işläp bejeriş prosesinde 40 we 50℃-de has ýokary durnuklylygy görkezdi.³³Şonuň ýaly-da, Lueangjaroenkit we ş.m.^al.37we Çairin we ş.m.^al.42Trametes polyzona KURNW027 we Trametes polyzona WR710-1-den alnan lakkazalaryň 50 °C-da degişlilikde 1 sagatlap durnuklylygy barada habar berildi. Dürli biotehnologiýa pudaklarynda ulanylýan peýdaly biokatalizator hökmünde lakkaza giň temperatura aralygynda gowy durnuklylyga we öndürijilige eýe bolmaly.
*Pleurotus ostreatus* NRC 620-den alnan lakkazanyň termostatik durnuklylygy (a) we pH durnuklylygy (b). Termostatik durnuklylyk ferment erginini degişlilikde 0,05 M natriý fosfat buferinde (pH 7.0) 40, 50, 60 we 70 °C-de 2 sagatlap inkubasiýa etmek arkaly bahalandyryldy. pH durnuklylygy ferment erginini 0,1 M sitrat buferinde we Tris buferinde (pH 3, 4, 6 we 7) 40 °C-de 2 sagatlap inkubasiýa etmek arkaly bahalandyryldy. Galyndy işjeňlik inkubasiýadan soň substrat hökmünde ABTS ulanylyp hasaplandy.
Fermentleriň ulanylmagy we saklanmagy üçin iň amatly şertleri kesgitlemek üçin, biz pH-nyň lakkaza durnuklylygyna täsirini öwrendik. Dürli pH gymmatlyklaryna sezewar bolmak belok gurluşynyň durnuklylygyna düýpli täsir etdi we şeýdip ferment molekulasynyň durnuklylygyna we işjeňligine täsir etdi. Netijeler fermentiň kislotaly şertlerde has az durnuklydygyny, ýokary pH gymmatlyklarynda (neýtral we şerbetli sebitler) has gowy durnuklylygy görkezýändigini görkezdi. 7.0, 6.0, 4.0 we 3.0 pH gymmatlyklarynda, 120 minutdan soň fermentiň saklanma tizligi degişlilikde takmynan 100%, 62.54%, 52.39% we 11.14% boldy (3b-nji surat). *Strombus multisus* WRF03 lakkazasy neýtral pH gymmatlyklarynda (5.5–6.5) has ýokary durnuklylygy we kislotaly pH gymmatlyklarynda (4.0-dan aşak) has pes durnuklylygy görkezdi. 5.5, 6.0 we 6.5 pH derejelerinde 120 minutdan soň, fermentiň saklanyş derejesi degişlilikde takmynan 82%, 100% we 93% boldy.³³Haýrin we beýlekiler⁴²Trametes polyzona WR710-1-den alynýan lakkazanyň pH derejesi 6.0-dan 7.0-a çenli durnuklydygyny belledi, Sayed we beýlekiler bolsa...⁴⁵lakkazanyň neýtral pH şertlerinde has durnuklydygyny görkezdi. Şeýle-de bolsa, Cerrena unicolor-dan alnan lakkaza hem alkal şertlerinde durnuklylyk görkezdi (pH 9.0)⁴⁶Öwrenilen lakkazalar giň pH aralygynda ýokary durnuklylyk görkezdi. Bu senagat ulanylyşlary üçin möhüm häsiýet bolup biler.
Käbir metal ionlarynyň ferment işjeňligine hem höweslendiriji, hem-de tormozlaýjy täsirleri bolandygy sebäpli, olaryň ferment işjeňligine täsiri senagat ulanylyşynda göz öňünde tutulmalydyr. Bu örän möhümdir, sebäbi metal ionlary daşky gurşawyň umumy hapalanmalary bolup, daşky gurşawyň daşky gurşawyň durnuklylygyna we sintezine täsir edip biler.⁴⁷*Pleurotus ostreatus* NRC 620-den lakkaza köp sanly metal ionlarynyň täsirini öwrenmek üçin biz degişli tejribeleri geçirdik. 4-nji suratda görkezilişi ýaly, ulanylýan metalyň görnüşine baglylykda, metal ionlarynyň konsentrasiýasynyň 2,5 mM-den 10 mM-e çenli ýokarlandyrylmagy fermentiň işine ýaramaz täsir etdi. Mysal üçin,^Mg²⁺ , ^Co²⁺ , ^Zn²⁺, we^Cu²⁺ferment işjeňligini höweslendirip we işjeňleşdirip biler, şol bir wagtyň özünde^Na⁺ , ^Mn²⁺ , ^Ca²⁺, we^K⁺fermentiň işjeňliginiň öňüni alyp bilerdi. 10 mM konsentrasiýasynda Cu²⁺ we Mg²⁺ ionlary *Pleurotus ostreatus* NRC 620-den lakkaza işjeňliginiň iň güýçli aktiwatorlary bolup, degişlilikde takmynan 34% we 20% aktiwasiýa derejesini üpjün etdi. Şeýle-de bolsa, 10 mM konsentrasiýasynda Ca²⁺ ionlary lakkazanyň iň güýçli inhibitory bolup, fermentiň işjeňligini takmynan 60% azaldyp bildi.
Metal ionlarynyň Pleurotus ostreatus NRC 620 lakkazasynyň işjeňligine täsiri. Lakkaza 2,5 mM we 10 mM konsentrasiýalarynda dürli metal ionlaryny öz içine alýan natriý fosfat buferinde (0,05 M, pH 7,0) 10 minutlap inkubasiýa edildi. Soňra reaksiýa substratyň (ABTS) goşulmagy bilen başlandy, şondan soň deňeşdirme işjeňligi ölçeldi.
Biziň netijelerimiz Mg²⁺ we Cu²⁺-nyň *Trametes polyzona* WRF03³ işjeňligini güýçlendirýändigini anyklan beýleki awtorlaryň netijeleri bilen gabat gelýär. Castaño we beýlekiler⁴⁸ *Xylaria* sp.-den alynýan lakkazanyň belli bir derejede mis ionlary (Cu²⁺) tarapyndan höweslendirilýändigini anykladylar. Mundan başga-da, Foroutanfar we beýlekiler⁴⁹ we Si we beýlekiler⁵⁰ degişlilikde *Paraconiothyrium variabile* we *Trametes pubescens*-den alynýan lakkazalar boýunça şuňa meňzeş gözlegleri geçirdiler. Bu fermentiň II görnüşli mis baglanyş ýeri (T2) belli bir konsentrasiýada Cu²⁺ bilen doýgunlaşdyrylyp bilner, bu bolsa ýokary Cu²⁺³⁹ konsentrasiýalarynda lakkaza işjeňliginiň höweslendirilmegini düşündirip biler. Ak çüýreme kömelekleriniň lakkazalary köp mis atomlaryny öz içine alýan oksidazalar bolandygy sebäpli, mis ionlarynyň lakkaza işjeňligine täsiri dürli-dürli we höweslendiriji we tormozlaýjy täsirlerden neýtral täsirlere çenli üýtgeýär.⁵¹ Tersine, Çžou we beýlekiler^{. [52]}habar berdi^Cu²⁺Taýwanyň ýerasty termitiniň (Odontotermes formosanus) lakkaza işjeňliginiň öňüni aldy. Şeýle-de bolsa, Cerena sp. HYB07 lakkazalary^[53]we Clitocybe maxima^[54]mis ionlaryndan täsirlenmedi.
Substratyň spesifikligi onuň kinetiki parametrleri (Km we Vmax) bilen görkezildi; substratyň fermente baglanyş affinligi näçe güýçli bolsa, Km gymmaty şonça pes we substratyň spesifikligi şonça ýokary boldy.^3,21,55*Pleurotus ostreatus* NRC 620-den alynýan lakkazanyň kinetiki parametrleri (Km we Vmax) GraphPad Prism 6.0 programma üpjünçiligini ulanyp, Lineweaver-Burk grafikini çyzmak arkaly kesgitlenildi (5-nji surat). ABTS substrat hökmünde ulanylanda, netijeler 1.99 mM we 16217 μmol boldy.^{min⁻¹ L⁻¹,}degişlilikde. Elsaýed we beýlekiler.²¹ABTS oksidlenmesi üçin Km gymmatlyklarynyň degişlilikde 0,1 mM we 0,064 mM bolandygyny habar berdi, bu bolsa Lac A we Lac B izoenzimleriniň ABTS üçin ýokary derejede ýakynlygyny görkezýär. Mundan başga-da, Vmax gymmatlyklary 0,182 μmol boldy^min⁻¹we 0,603 μmol^min⁻¹degişlilikde. Alnan Km gymmaty Trametes polyzona WRF03-iňkiden (8.66 mM) pesdi; mundan başga-da, olaryň Vmax gymmaty (1429 mmol min⁻¹) hem^aşakyABTS substrat hökmünde ulanylanda.33 Şeýle hem, Lentinus squarrosulus MR13 we Trametes sp. AH28-2 lakkaza konsentrasiýalarynyň Km gymmatlyklary degişlilikde 0,0714 mM we 0,025 mM, Vmax gymmatlyklary bolsa 0,0091 mM min−1 we 0,67 mM min−1 mg−1 boldy (ABTS bilen deňeşdirilende)^{degişlilikde.56,57}
ABTS konsentrasiýasynyň *Pleurotus ostreatus* NRC 620-den alnan lakkazanyň işjeňligine täsiri öwrenildi we başlangyç reaksiýa tizliginiň ABTS konsentrasiýasyna garşy Lineweaver-Burk grafigi düzüldi. Lakkazanyň dürli konsentrasiýalary (0,025–3,0 mM) bolan ABTS-iň oksidlenme reaksiýasy kinetiki parametrleri (Vmax we Km) kesgitlemek üçin pH 4,5-de ölçeldi. Michaelis-Menten kinetiki sabitleri reaksiýa tizliginiň substrat konsentrasiýasyna garşy garşy Lineweaver-Burk grafigini ulanyp hasaplanyldy. Kinetiki sabitler GraphPad Prism 6.01 programma üpjünçiligini ulanyp Lineweaver-Burk grafiginden hasaplanyldy.
Pektinazalar ýaly däp bolan arassalaýjy fermentler pektik maddalary gidrolizläp, ýapyşyklygy we bulanyklygy azaldýar. Olar gurluş polisaharidlerini netijeli dargadýar we köplenç selýulazalar we gemisellulazalar ýaly beýleki fermentler bilen bilelikde çykarylyşyny we aýdyňlygyny ýokarlandyrmak üçin ulanylýar. Şeýle-de bolsa, pektinazalar, esasanam alma we üzüm şiresi ýaly şirelerde bulanyklygyň we oksidatiw garaňkylygyň esasy sebäpleri bolan fenol birleşmelerini nyşana almaýar.⁵⁸Tersine, lakkazalar fenol birleşmeleriniň oksidlenmegini katalizläp, olary çökündi ýa-da süzgüç arkaly aýryp bolýan has uly, eremeýän molekulalara polimerleşdirýär. Bu mehanizm diňe bir aýdyňlygy gowulandyrman, eýsem fenol birleşmeleriniň döredýän oksidleýji garaňkylaşma ähtimallygyny azaltmak arkaly şiräniň saklanyş möhletini uzaldýar. Mundan başga-da, lakkaza esasynda arassalaýyş prosesleri ýeňil gaýtadan işlemek şertlerinde (pH 3.5–5.5, temperatura 25–40 °C) amala aşyrylyp bilner, bu bolsa olary iýmitlik ýa-da organoleptik häsiýetlerine zyýan ýetirmezden inçe şireler üçin amatly edýär.⁵⁹Barlaglar pektinaza bilen bejermegiň şiräni 1-2 sagadyň içinde aýdyňlaşdyryp bilýändigini görkezdi, lakkaza bilen bejermek bolsa, adatça, fenol birleşmelerini doly azaltmak üçin has uzak reaksiýa wagtyny (3-6 sagat) talap edýär. Şeýle-de bolsa, bu proses fermenti hereketsizleşdirmek ýa-da lakkazany mehaniki aýdyňlaşdyryş usullary bilen utgaşdyrmak arkaly optimizirlenip bilner.⁶⁰Bu gözlegde çig ekstraktyň ferment profilini öwrenmek lakkaza we α-amilaza işjeňliginiň möhümdigini ýüze çykardy, pektinaza we ksilanaza işjeňligi bolsa örän pesdi we selýulaza işjeňligi ýüze çykarylmady. Şonuň üçin bulanygyň we fenol mukdarynyň azalmagy esasan lakkazanyň täsiri bilen baglanyşyklydy, ýapyşyklygyň üýtgemegi bolsa bölekleýin amilazanyň täsiri bilen baglanyşykly bolup biler.
1-nji tablisada täze sykylan alma şiresiniň we lakkaz bilen işlenen nusgalaryň fiziki-himiki parametrleri görkezilýär. Netijeler täze sykylan alma şiresiniň (71,59%) hasylynyň lakkaz bilen işlenen nusgalaryňkydan (87,34%) pesdigini görkezdi. Bu netijeler Pilnik we Orange-iň netijeleri bilen gabat gelýär.⁶¹, miweleri gaýtadan işlemekde fermentleriň ulanylmagynyň şiräniň çykarylyşyny artdyryp, süzgüçlenişini gowulandyryp we ýokary hilli, konsentrasiýa üçin arassa şiräni alyp biljekdigini görkezdi. Şireniň çykarylyşynyň artmagy, esasan, şiräniň içinde ereýän şekerleriň mukdarynyň artmagy bilen baglanyşyklydyr. Miweleriň fermentatiw gidrolizi mahalynda önümiň öýjük diwarlaryndaky mezogleýa we pektin ýok edilýär we neýtral şekerler we kislotalar ýaly ereýän maddalara öwrülýär.^62.Ferment bilen işlenen alma şiresiniň pH derejesi gözegçilik toparynyňkydan ep-esli pesdi (P < 0,05) we iki toparyň pH derejesi saklananda ep-esli ýokarlandy (1-nji tablisa). Bu netijeler Mark we beýlekileriň netijeleri bilen gabat gelýär.⁶³, ol ýylylyk bilen işlenilenden soň saklanandan soň keşýu miwe suwunyň pH derejesiniň peselendigini belledi. Pektiniň dargamagy we ferment bilen işlenilenden soň galakturon turşusynyň emele gelmegi saklama wagtynda pH derejesiniň ýokarlanmagyna sebäp bolup biler. Ferment bilen işlenilen nusgalaryň pH derejesi saklama döwründe 4,05 bilen 4,31 aralygynda galdy, işlenilmedik alma suwunyň pH derejesi bolsa 4,12 bilen 4,33 aralygynda boldy.
Işlenmedik we lakkaza bilen işlenilen nusgalaryň umumy turşulygy (TA) saklamak wagtynyň uzalmagy bilen azalýan meýli görkezdi (1-nji tablisa). Turşulygyň azalmagy organiki turşularyň uglewodlara öwrülmegi ýa-da ferment reaksiýalary, şeýle hem şire saklananda oksidlenme bilen baglanyşyklydyr.⁶⁴Gözegçilik alma şiresiniň we ferment bilen işlenen nusgalaryň umumy turşulygy beýleki şireleriňkiden pesdi (çilek şiresi 0.9%, erik şiresi 2.2%, kumkwat şiresi 1.0%, erik şiresi 2.4%, apelsin şiresi 0.8%), ýöne beýleki şireleriňkine meňzeşdi (meselem, armyt şiresi 0.3%).⁶²Täze sykylan alma şiresiniň işlenilmedik ýagdaýyndaky bu tapawutlar ösüş şertleri, genetiki faktorlar, ýetişenlik derejesi we gaýtadan işlemek usullary ýaly dürli faktorlara bagly bolup biler.⁶⁵Gözegçilik we lakkaza bilen işlenen alma şiresiniň umumy turşulygynyň peselmegi Singh we beýlekiler tarapyndan görkezilen netijeler bilen gabat gelýär.⁶⁶74 gün saklanandan soň Jin Nuo alma şiresiniň umumy turşulygynyň peselmegi barada. Beýleki tarapdan, Oşmianskiý we Wojdylo⁶⁷däp bolan arassalaýyş usullarynyň täsirini öwrenende alma şiresiniň turşulygynda düýpli üýtgeşmeler tapmady.
1-nji tablisada görkezilen netijeler lakkaza bilen işlenilen alma şiresiniň umumy ereýän gaty maddalarynyň (TSS) gymmatynyň işlenilmedik nusgadakydan ýokarydygyny görkezýär. Bu netijeler çap edilen barlaglar bilen gabat gelýär.⁶⁸Mundan başga-da, 1-nji tablisada gözegçilik alma şiresiniň toparynyň TSS gymmatynyň başlangyç wagt nokadynda 9,58 bolandygy we saklamak döwrüniň ahyryna çenli 11,05-e ýetendigi görkezilýär. Bu gymmatlyklar Hamid we beýlekiler tarapyndan habar berlen täze alma şiresiniň TSS gymmatlaryndan pesdir.⁶⁹(degişlilikde 11.2 we 11.80). Lakkaz bilen işlenen alma şiresiniň nusgalarynyň TSS gymmaty ep-esli ýokarlandy, 11.23-den başlap, 4°C-de iki hepde saklanandan soň 12.93-e ýetdi (1-nji tablisa). Saklamak wagtynda TSS-iň meňzeş ýokarlanmagy sitrus miwelerinde, limonlarda we süýji apelsinlerde hem syn edildi. Saklamak wagtynda jemi ereýän gaty maddalaryň (TSS) artmagy polisaharidleriň (krahmalyň) monosaharidlere (şekerlere) gidrolizlenmegi, şiräniň suwsuzlanmagy sebäpli konsentrasiýasynyň artmagy we şiredäki pektiniň ereýän gaty maddalara dargamagy bilen baglanyşykly bolup biler. Jemi ereýän gaty maddalaryň (TSS) artmagy, Hamed we beýlekiler tarapyndan habar berlişi ýaly, pektin ýa-da sellýulozanyň degişlilikde pektin ýa-da sellýuloza tarapyndan ereýän şekerlere öwrülmegi ýa-da krahmalyň şekerlere gidrolizlenmegi bilen emele gelip bilýän ereýän şekerleriň artmagy bilen baglanyşykly bolmagy mümkin.^69.Alma şiresiniň häsiýetlerine lakkazanyň täsirini wizual taýdan synlap bolýar, sebäbi lakkaza bilen işlenen alma şiresi işlenilmedik şireden has gowy akymlylyk we pes ýapyşyklyk görkezýär. Bu gözegçilik 1-nji tablisada görkezilen; Ferment bilen işlenen nusganyň ýapyşyklygy 1,87 cP, gözegçilik nusgasynyň ýapyşyklygy bolsa 2,95 cP boldy. Ýapyşyklygyň bu ep-esli azalmagy, pektin ýaly maddalaryň suw saklamak ukybynyň ýokary bolmagy we bitewi tor gurluşynyň emele gelmegi bilen baglanyşykly bolmagy mümkin.
Bu gözlegde, lakkazanyň alma şiresiniň goňurlaşma indeksine (BI) täsiri spektrofotometr arkaly 420 nm-de siňdirilişi ölçemek arkaly öwrenildi. Netijeler 1-nji tablisada görkezilen. Saklanylanda, işlenilen we işlenilmedik toparlardaky alma şiresiniň nusgalarynyň BI kem-kemden artýan meýli görkezdi. BI goňurlaşma derejesini görkezýär we şeýle hem hyzmat edip biler.^{möhüm bir}fermentatiw we fermentatiw däl goňurlaşma reaksiýalarynyň görkezijisi. Saklama döwründe siňdiriş ep-esli ýokarlandy (P < 0,05). Saklamanyň ahyrynda,_A420Gözegçilik we ferment bilen işlenilen toparlardaky alma şiresiniň nusgalarynyň gymmaty degişlilikde takmynan 217% we 121% ýokarlandy (1-nji tablisa). Netijeler ferment bilen işlenişiň garaňkylaşma derejesini takmynan 56% netijeli azaldyp biljekdigini görkezýär. Bezerra we beýlekileriň netijeleri.^[19]] biziň netijelerimiz bilen gabat gelýär; Olar alma şiresini aýdyňlaşdyrmak üçin lakkaza-glutaraldegid-kokos süýümini ulanyp, onuň asyl reňkini 61% peseltdiler.
Miwe suwlaryndaky polifenollar adam bedenine oňyn iýmit we bejeriş täsirini ýetirse-de, olar beloklar bilen reaksiýa girip, suwuň bulanmagyna, çökündisine ýa-da bulanmagyna sebäp bolup, şeýdip önümiň tagamyny we ysyny üýtgedip, onuň saklanyş möhletini azaldyp bilýärler.⁷¹Bu gözlegiň maksady Pleurotus ostreatus NRC 620-den alynýan lakkaza ulanyp, alma suwunyň fenol birleşmesiniň mukdaryny howpsuz azaltmakdy. 1-nji tablisada görkezilen netijeler, lakkaza bilen işlenen alma suwunyň umumy fenol birleşmesiniň mukdarynyň 4 °C-de saklanmazdan öň ep-esli azalandygyny görkezýär. Mundan başga-da, öwrenilen iki nusgada hem saklananda umumy fenol birleşmesiniň mukdary hem azaldy (1-nji tablisa). Sandri we beýlekiler tarapyndan geçirilen gözleg.⁷²ferment bilen işlenen alma şiresiniň antioksidant işjeňligini we fenol birleşmeleriniň düzümini saklap biljekdigini görkezdi. Şeýle-de bolsa, Lettera we beýlekiler tarapyndan geçirilen gözlegiň netijeleri.⁷³apelsin suwuny kömelek lakkazasy bilen bejermegiň ondaky fenol birleşmeleriniň mukdaryny 45% -e çenli azaldyp biljekdigini görkezýär.
Fenol birleşmeleriniň erkin radikallary arassalamak, ýekelik kislorody azaltmak we söndürmek, wodorod atomyny geçirmek we erkin radikallara elektron bermek ýaly häsiýetlere eýedigi görkezildi, bu bolsa olary güýçli antioksidantlara öwürýär.⁷⁴Şonuň üçin bu gözlegde 14 günläp sowadyjyda saklanan alma şiresiniň antioksidant işjeňligine lakkazanyň täsirini bahalandyrmak üçin DPPH we FRAP esasly usullar ulanyldy (2-nji tablisa). Iki usul hem saklanyş wagtynda antioksidant işjeňliginiň artandygyny görkezdi, bu bolsa erkin fenol birleşmeleriniň artmagy ýa-da Maillard reaksiýa önümleriniň (MRP) emele gelmegi bilen baglanyşykly bolup biler, Maillard reaksiýa önümleri bolsa antioksidant işjeňliginiň artmagynyň sebäbi bolmagy mümkin.⁷⁵Fermentsiz goňurlaşma reaksiýalary (askorbin turşusynyň dargamagy, Maýlard reaksiýalary we şekerleriň kislota katalizlenen dargamagy bilen birlikde) goňur pigmentleri (melanoidinler) öndürýär. Askorbin turşusynyň aralyk dargama önümleri we şekeriň dargama önümleri (karbonil birleşmeleri ýaly) Maýlard reaksiýalary arkaly aminokislotalar bilen reaksiýa girip bilýär.⁷⁶Saklanylanda miweleriň we gök önümleriň garaňkylaşmagy giňden öwrenilen hem bolsa, bu reaksiýalar baradaky düşünjämiz çäkli bolmagynda galýar.⁷⁷FRAP usuly bilen deňeşdirilende, lakkaz bilen işlenen alma şiresiniň DPPH usuly bilen antioksidant işjeňligi ep-esli pes boldy (2-nji tablisa) we ähli nusgalaryň antioksidant işjeňligi saklamak wagtynyň uzalmagy bilen ep-esli ýokarlandy. Bu gözlegde antioksidant işjeňligini kesgitlemek üçin iki dürli usul ulanyldy, sebäbi olaryň ýörelgeleri tapawutlanýar. DPPH usuly erkin radikallary neýtrallaşdyrmak ukybyny ölçeýär, FRAP usuly bolsa demir ionlaryny azaltmak ukybyny ölçeýär. Şonuň üçin öwrenilen nusgalaryň antioksidant işjeňligini has gowy düşünmek üçin antioksidant işjeňligini kesgitlemek üçin birnäçe usuly ulanmak maslahat berilýär.⁷⁸
Bu gözlegiň esasy netijeleriniň biri, *Pleurotus ostreatus* laccase NRC 620-niň 70°C we pH 3.0-da optimal işjeňlik görkezýändigidir. *Trametes versicolor* we *Ganoderma lucidum* laccases ýaly şiräni arassalaşdyrmak üçin giňden ulanylýan beýleki kömelek laccases bilen deňeşdirilende, *P. ostreatus* NRC 620 ýokary termal durnuklylyk we has kislotaly pH görkezýär. *Trametes versicolor* we *Ganoderma lucidum*-dan alnan laccases adatça 50-60°C aralygynda we pH gymmatlyklary 3.5 bilen 5.0 aralygynda optimal işjeňlik görkezýär. Bu tapawut, esasanam pes pH gymmatlyklarynda durnuklylygyň möhüm bolan kislotaly şireler üçin şiräni arassalaýyş netijeliliginiň ýokarlanmagyna goşant goşup biler. *P.-niň özboluşly aýratynlygy. Başga öwrenilen kömelek laccases bilen deňeşdirilende, *Pleurotus ostreatus* NRC 620 has kyn şertlerde netijeli işlemek ukybyny görkezýär. Onuň ýokary optimal işjeňlik temperaturasy senagat ulanylyşlarynda mümkin bolan artykmaçlyklary, mysal üçin, has çalt reaksiýa tizligini we mikrob hapalanmagynyň azalmagyny görkezýär. Köp şireleriň kislotaly tebigatyna gowy laýyk gelýän pes pH-y şire arassalaýyş proseslerinde peýdaly bolup biler. Bu netijeler giň möçberli ulanylyş üçin has giňişleýin gözlegleri esaslandyrýar, bu bolsa *Pleurotus ostreatus* NRC 620-ni däp bolan kömelek lakkasy çeşmelerine alternatiwa edýär. Öňki barlaglar bilen deňeşdirilende, optimal temperaturanyň 60°C, optimal pH-nyň bolsa 3.0 bolandygyny anykladyk. 60°C-da 80 minutlap reaksiýadan soň, *Ganoderma lucidum* lakkasy saklanyp galdy.⁴⁶işjeňliginiň %.79 Kurniawati we Nisel boýunça⁸⁰, *Ganoderma lucidum* fermentleri 25°C we pH gymmatlyklary 5.0-dan 8.0-a çenli aralykda ajaýyp we orta derejeli durnuklylyk, şeýle hem pH 6.0 we 10-dan 30°C-a çenli aralykda durnuklylyk görkezýär. Bu gözlegde biz *Pleurotus ostreatus* üçin ferment işjeňligi üçin optimal pH we temperatura degişlilikde 3.0 we 70°C bolandygyny anykladyk. Iki sagatlap 40°C we 50°C-da inkubasiýa edilenden soň, ferment işjeňliginiň degişlilikde 68.33% we 59.61% -ni saklady. Mundan başga-da, Pleurotus ostreatus NRC 620 lakkazasy 50°C-dan 80°C-a çenli giň temperatura aralygynda ýokary işjeňlik görkezdi we iň ýokary işjeňlige (69%–98%) ýetdi, iň ýokary işjeňlik bolsa 70°C-da syn edildi.
Netijede, statik şertlerde alnan ustriça kömelek lakkazasy NRC620 dürli pH we temperatura şertlerinde iň gowy işjeňligi we durnuklylygy görkezdi we beýleki ferment çeşmelerine garanyňda has ýokary durnuklylygy görkezdi. 10 mM MgSO₄ we CuSO₄ goşulmagy ferment işjeňligini degişlilikde takmynan 21% we 35% ýokarlandyrdy. Alma şiresine gaýtadan işlenende, ferment pH we ýapyşyklygy peseltdi, fenol mukdary bolsa saklanýan wagtynda diňe birneme azaldy.
Netijeler lakkazyň azyk senagatynda, esasanam içgileri arassalaýjy önümlerde mümkinçiliklerini tassyklaýar. Fenol birleşmelerini aýratyn dargatmak bilen, lakkaz diňe bir bulanylygy azaldyp we arassalygy gowulandyryp, ýumşak iş şertlerinde miwe suwlarynyň hilini hem saklaýar. Jelatin, bentonit we silika geli ýaly däp bolan arassalaýjy serişdelerden tapawutlylykda, lakkaz galyndy döretmeýär ýa-da içgilerden ýakymly yslary aýyrmaýar, bu bolsa ony has ekologiýa taýdan arassa we durnukly wariant edýär. Mundan başga-da, beýleki fermentler we süzgüç usullary bilen deňeşdirilende, lakkaz önümiň hiline zyýan ýetirmezden maksada gönükdirilen we tygşytly çözgüt hödürleýär.
Kyomuhimbo, HD we Brink, HG. Mis saklaýan lakkazalaryň ulanylyşy we hereketsizleşdiriliş strategiýalary; syny. Heliyon 9, e13156 (2023).